Các nhà nghiên cứu ghi nhận tỷ lệ sống sót cao hơn và dấu hiệu mô học của sự tái sinh hepatopancreas trong các thử nghiệm tại Việt Nam với INVE
Hội chứng tử vong sớm (EMS) là một hội chứng quản lý. Một sự kết hợp của các yếu tố bất lợi trong dinh dưỡng, an toàn sinh học, sinh lý chủ thể và đặc biệt là quản lý vi sinh vật dẫn đến tình huống mà các tác nhân gây bệnh cơ hội như Vibrio parahaemolyticus có thể phát triển và chiếm ưu thế trong microbiota xung quanh và bên trong tôm. Khi các yếu tố virulence bổ sung như sự sinh sản trong dạ dày và sản xuất độc tố được thêm vào tình huống này, các bệnh như hoại tử hepatopancreas cấp tính (AHNPD) sẽ gây ra thiệt hại nghiêm trọng.
INVE Aquaculture đã làm việc về vấn đề này trong hơn một thập kỷ, trong bối cảnh “bệnh vibriosis” truyền thống. Vì vậy, đó là một bước hợp lý để mở rộng các phương pháp điều trị phòng ngừa và điều trị đã thiết lập của chúng tôi sang biến thể mới của Vibrio. Khi áp dụng các probiotic của chúng tôi tại hiện trường, như một phần của giao thức can thiệp toàn diện, một lượng lớn dữ liệu thực nghiệm về tác dụng có lợi của Bacillus probiotics trong nuôi tôm đã được thu thập. Trong nghiên cứu này, mục tiêu của chúng tôi là đo lường các tác động của probiotics Sanolife trong một mô hình thách thức AHPND chuẩn hóa dưới điều kiện phòng thí nghiệm kiểm soát.
Tôm thử nghiệm
Tôm trắng Thái Bình Dương (Litopenaeus vannamei) được nuôi và chăm sóc tại trại giống và nhà ươm tôm của Trường Đại học Thủy sản và Nghề cá Cần Thơ. Các nguồn tôm đã được giám sát đối với WSSV, YHV (IQ2000 YHV/GAV) và Vibrio AHPND để duy trì trạng thái SPF.
Đối với nghiên cứu này, những con tôm ở giai đoạn PL20-25, với trọng lượng cơ thể trung bình khoảng 1g, đã được sử dụng, đây là độ tuổi và kích thước bị ảnh hưởng nhiều nhất bởi EMS/AHPND dưới điều kiện nuôi cấy. Nước biển tự nhiên đã được sử dụng xuyên suốt các thí nghiệm, được tiệt trùng và pha loãng đến 25g/L, độ mặn điển hình cho P. vannamei lớn lên. Nghiên cứu này đã được công bố ban đầu trên tạp chí Aquaculture Asia Pacific 11(6):14-17.
Vi khuẩn
Chúng tôi đã chỉ định dòng vi khuẩn được sử dụng trong nghiên cứu này là LTS14. Nó được tách biệt ban đầu từ tôm được chẩn đoán có bệnh AHPND (histo)pathology tại Việt Nam vào tháng 5 năm 2014 và được lưu trữ ở -80°C trong TSB bổ sung 1.5% NaCl và 25% glycerol. Vi khuẩn được xác định là V. parahaemolyticus, bằng các thuộc tính xanh trên TCBS, các bài kiểm tra hóa sinh truyền thống API 20E và PCR với các mồi LTH. Ngoài ra, mẫu phân lập đã cho kết quả dương tính với PCR bằng các mồi AP3.
Trước khi nghiên cứu, tính virulence của LTS14 đã được đánh giá rộng rãi bằng các thách thức in vivo, và so sánh với các dòng khác. Liều thách thức đã được điều chỉnh nhằm thu được đường cong tử vong LD50-60 tái lập (Hình 1).
Thử thách
Các nền văn hóa vi khuẩn đã được nuôi cấy trong 24 giờ trong TSB bổ sung 1.5% NaCl ở 28°C. Dựa trên đường cong chuẩn được xác định cho dòng, dung dịch vi khuẩn đã được pha loãng trong nước biển đến OD tương ứng với 108 tế bào/ml. Tôm đã được ngâm trong dung dịch vi khuẩn này trong 15 phút với sự thông khí liên tục và sau đó cả dung dịch vi khuẩn và tôm đã được chuyển đến bể chứa nước biển, giảm nồng độ vi khuẩn xuống còn 105, 2×105, 106, 2×106 tế bào/mL. Không có nước nào được thay thế cho đến hai ngày sau thách thức, từ thời điểm đó 20% nước đã được làm mới mỗi ngày.
Thiết kế thí nghiệm
Tôm thí nghiệm được nuôi với mật độ 30 cá thể mỗi bể với 30 lít nước, thông khí liên tục và các thông số nước được giữ ổn định ở 29±1°C, pH 7.7±2, NH3
Các phương pháp điều trị sau đây được so sánh trong ba lần lặp lại:
| Mô tả phương pháp điều trị | Thử thách với V. parahaemolyticus | |
| Kiểm soát âm (NC) | – | – |
| Kiểm soát dương (PC) | – | + |
| Kiểm soát kháng sinh (AB) | doxycycline 2g kg-1 thức ăn | + |
| Sanolife PRO-2 (PRO-2) | 10g kg-1 thức ăn | + |
| Sanolife PRO-W (PRO-W) | 5 mg l-1 | + |
Các ứng dụng thức ăn được phủ lên trên mọi khẩu phần và ứng dụng nước Sanolife PRO-W được thêm vào nước của bể một lần mỗi ngày. Liều của Sanolife PRO-2 là 2×108 CFU Bacillus mỗi g thức ăn và liều của Sanolife PRO-W là 2.5×105 CFU Bacillus mỗi ml nước. Ngoại trừ NC, tất cả tôm đã chịu thách thức với 2×105 CFU/mL của LTS14 và theo dõi lâm sàng được thực hiện trong 15 ngày sau khi thách thức.
Đánh giá các phương pháp điều trị được dựa trên sự so sánh thống kê của: (1) mức độ và thời gian khởi phát các triệu chứng lâm sàng; (2) tỷ lệ tử vong tích lũy; và (3) mức độ điểm trên mô bệnh học.
Mức độ triệu chứng lâm sàng AHPND
Các triệu chứng lâm sàng như chán ăn, uể oải và màu sắc nhạt của cơ thể và hepatopancreas đã được quan sát thấy ở 75% động vật trong nhóm kiểm soát dương ngay từ 24 giờ sau thách thức. Tôm trong nhóm AB và Sanolife PRO-W cũng cho thấy triệu chứng AHPND, nhưng với triệu chứng chán ăn ít rõ ràng hơn, và trong nhóm động vật giảm đi (50%). Ít hơn 20% tôm nhận được Sanolife PRO-2 được ghi nhận có triệu chứng AHPND, với một sự chậm trễ đáng kể 72h sau thách thức. Những bức ảnh đại diện cho các triệu chứng rõ ràng được hiển thị trong Hình 2.
Tỷ lệ tử vong giảm
Tử vong bắt đầu ở nhóm PC 1 dpi (ngày sau khi nhiễm) và đạt tỷ lệ tử vong tích lũy 52±10% sau 10 ngày (Hình 3). Trong các nhóm AB và Sanolife PRO-W, tử vong cũng bắt đầu ở 1 dpi và tỷ lệ tử vong tích lũy đạt 32±12% và 34±5% tương ứng. Một sự trì hoãn trong tỷ lệ tử vong 4 ngày đã được ghi nhận cho nhóm Sanolife PRO-2, với tỷ lệ tử vong tích lũy dừng lại ở 17±3% sau 9 ngày. Kết quả Sanolife PRO-2 thấp về mặt thống kê so với PC, nhưng cũng vẫn cao hơn so với NC 3±3%.
Mô bệnh học
Các hình ảnh đại diện của phân tích mô bệnh học của tôm trong các phương pháp điều trị khác nhau.
Triển vọng
Mô hình thách thức AHPND được phát triển và chuẩn hóa cho nghiên cứu này đã dẫn đến một đường cong tỷ lệ tử vong của nhóm kiểm soát dương đạt tối đa sau vài ngày, và không tiêu diệt tất cả tôm bị nhiễm. Điều này phù hợp hơn với các bùng phát AHPND trên các trang trại tôm và cũng cung cấp cơ hội tốt hơn cho việc đánh giá các can thiệp điều trị có thể hơn nhiều mô hình thách thức đã báo cáo mà sử dụng nồng độ vi khuẩn cao không thể chấp nhận được và dẫn đến tỷ lệ tử vong cấp tính.
Kết quả từ nghiên cứu trong phòng thí nghiệm của chúng tôi cho thấy rằng các phương pháp điều trị probiotic Sanolife PRO-2 và Sanolife PRO-W tự chúng có tác dụng tích cực, chẳng hạn như tỷ lệ sống cao hơn và dấu hiệu mô học của sự tái sinh hepatopancreas. Tuy nhiên, giống như các phương pháp điều trị kháng sinh, các phương pháp điều trị probiotic không đủ để hoàn toàn bảo vệ tôm khỏi bệnh. Để làm điều này, cần một phương pháp tổng thể, hỗ trợ và điều chỉnh hệ thống nuôi dưỡng và trạng thái sức khỏe của tôm ở mọi cấp độ.
Nguồn : https://www.globalseafood.org/advocate/probiotics-benefit-pacific-white-shrimp-challenged-with-ahpnd/
